三聚氰胺的快速檢測(cè)
三聚氰胺簡(jiǎn)稱三胺、氰脲酰胺，是一種用途廣泛的具有氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)的有機(jī)化工原料，因其結(jié)構(gòu)中還有多個(gè)氨基氮，而目前對(duì)蛋白的定量主要依靠凱式定氮，因而三聚氰胺被一些不法商販添加到蛋白中以提高蛋白檢測(cè)中氮的含量。2007年3月美國(guó)發(fā)生的貓狗寵物非正常死亡事件以及最近國(guó)內(nèi)的奶粉事件都是由此造成的。目前，檢測(cè)三聚氰胺的主要方法是HPLC、LC-MS、GC-MS，但對(duì)儀器及實(shí)驗(yàn)室要求較高，樣品處理和操作也相對(duì)要求較高。相對(duì)而言，檢測(cè)試劑盒操作方便，且不需要大筆的儀器投入，同時(shí)也具有很好的靈敏度。這類試劑盒多采用直接競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)， 對(duì)UD和60%甲醇兩種方法處理樣品所獲得的三聚氰胺萃取液進(jìn)行免疫測(cè)定可以獲得相同的結(jié)果，可用來定量檢測(cè)被污染樣品中的三聚氰胺。
檢測(cè)原理：三聚氰胺檢測(cè)試劑盒是競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫反應(yīng)。三聚氰胺從樣品中萃取出來。三聚氰胺-HRP，樣品萃取液和標(biāo)準(zhǔn)品一起加入包備有三聚氰胺抗體的微孔中發(fā)生反應(yīng)，經(jīng)過30分鐘的培養(yǎng)，樣品中的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP與三聚氰胺抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，任何沒有結(jié)合的三聚氰胺和三聚氰胺-HRP將被沖洗掉，顯色酶底物加入微孔中，任何結(jié)合的三聚氰胺-HRP都會(huì)使液體現(xiàn)藍(lán)色。20分鐘后終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀數(shù)。將未知樣品的讀數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)比較就能得出樣品中的三聚氰胺濃度。
實(shí)驗(yàn)所需儀器設(shè)備及材料：
1.去離子水或蒸餾水（ZealPure）
2.20-200ul的單道微量加樣槍(NPX-200)
3.50-20000ul的8道微量加樣槍(00-NP7-8L)
4.酶標(biāo)儀(405nm)(BioTek ELx800)
5.計(jì)時(shí)器(Casio)
6.洗瓶(Nalgene)
檢測(cè)程序：
1.所有試劑恢復(fù)到室溫，洗瓶裝好去離子水；
2.準(zhǔn)備好所需要的微孔條；
3.加100µL各個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋后樣品提取物到指定小孔，加50µL三聚氰胺-HRP；
4.輕微震蕩60秒，培養(yǎng)30分鐘；
5.倒掉小孔中液體，用移液器加水至小孔，倒掉液體。再重復(fù)操作3遍；
6.每個(gè)小孔加100µL底物；
7.培養(yǎng)20分鐘；
8.每個(gè)小孔加100µL終止液；
9.于酶標(biāo)儀450nm讀數(shù)。
結(jié)果解釋：
1.半定量可以由樣品的吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值的比較得出。樣品顏色比標(biāo)準(zhǔn)品顏
色淺的話，樣品中三聚氰胺濃度比標(biāo)準(zhǔn)品濃度高，樣品顏色比標(biāo)準(zhǔn)品顏色深的話，三聚氰胺濃度比標(biāo)準(zhǔn)品濃度低。
2.定量可由標(biāo)準(zhǔn)曲線圖得出，用樣品的吸光作X軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)值作Y軸。Y
軸上的相應(yīng)的點(diǎn)乘以相應(yīng)的稀釋度就是樣品的濃度。